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我想問PCR擴(kuò)增時(shí)使用的DNA模板濃度一般多大?加多少?

2022-12-19 00:20

我想問PCR擴(kuò)增時(shí)使用的DNA模板濃度一般多大?加多少?

1個(gè)回答

2022-12-19 03:41

我們一般不去特意檢測(cè)提取的得到的模板濃度,純度倒是要注意一下,紫外分光達(dá)到1.8即可,不過我們一般也不去檢測(cè).
PCR的時(shí)候可以設(shè)置梯度,分別加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl.
不要低于0.5μl,也不要高于3μl.選擇幾個(gè)梯度做一下看看哪個(gè)效果好就用哪個(gè).有時(shí)候?yàn)榱耸″X,就直接用1μl上去P,一般問題不大,出了問題再回頭做梯度也不遲.
總而言之,使得模板量在1μl左右最好.

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模板的濃度對(duì)PCR有什么影響，一般要多大濃度？

2個(gè)回答2022-12-21 18:32

要看用的是什么模板了，pcr的靈敏度很高，幾pg的DNA就能檢測(cè)出來，一般用pcr產(chǎn)物或者質(zhì)粒做模板，只需要1ng左右就可以，如果是基因組或者cDNA做模板，模板量可適當(dāng)增加。 PCR指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)...

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模板的濃度對(duì)PCR有什么影響，一般要多大濃度?

1個(gè)回答2022-12-19 00:20

那要看你用的是什么模板了。 pcr的靈敏度很高，幾pg的DNA就能檢測(cè)出來了。一般用pcr產(chǎn)物或者質(zhì)粒做模板，只需要1ng左右就可以了，如果是基因組或者cDNA做模板，模板量可適當(dāng)增加。

pcr反應(yīng)模板DNA濃度最低要求是多少？

3個(gè)回答2023-04-12 10:46

模板DNA濃度主要看你的PCR擴(kuò)增體系所使用的酶，一般普通的酶的話DN模板量在50到100ng都可以擴(kuò)增出來的，高效一點(diǎn)的酶的話幾ng也可以擴(kuò)增出來的。

為什么pcr的時(shí)候，DNA模板濃度高了，會(huì)有拖尾？

2個(gè)回答2023-04-04 17:36

DNA模板濃度高了，不僅會(huì)有拖尾，還可能會(huì)沒有PCR條帶。特別是在DNA模板純度不純的時(shí)候，會(huì)對(duì)PCR起抑制作用。 PCR反應(yīng)中，模板只要1ng就可以，所以模板濃度不要太高。

DNA電泳和濃度測(cè)量都很好，為什么PCR擴(kuò)不出來？用相同的體系和程序以前提取的DNA能擴(kuò)出來，為什么？

1個(gè)回答2022-09-10 14:08

那我建議你用以前的DNA作為陽性對(duì)照同時(shí)做一管，這樣才能知道除DNA模板以外，其他試劑沒有問題。這時(shí)候才要考慮是DNA模板的問題。因?yàn)镻CR反應(yīng)的條件不僅受到DNA模板的影響，還有其他因素，如：引...

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我使用的引物一般稀釋到10μM. 20微升體系每個(gè)引物加0.4微升即可。你的50微升體系加1微升也不算多。你降低下退火溫度試一試。

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